細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)簡介

細(xì)胞劃痕（修復(fù)）法是一種簡捷的測定細(xì)胞遷移運(yùn)動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至設(shè)定時(shí)間（采用無血清或低血清（<2%）排除細(xì)胞增殖的影響），取出培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長（修復(fù)）至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力。通常設(shè)定正常對照組與實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，判斷比較各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。

二、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)步驟

(1) 先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。   

(2) 在孔中加入約5×105個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞至匯合度達(dá)到90%以上。  

(3) 用頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕。  

(4) PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。

(5) 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0，12，24，48h時(shí)間點(diǎn)取樣，100倍鏡下拍照。如果細(xì)胞遷移（修復(fù)）能力較強(qiáng)，需相應(yīng)縮短觀察時(shí)間間隔。

(6) 結(jié)果分析：對不同時(shí)間點(diǎn)不同處理分組的劃痕間距進(jìn)行分析。